Kwantitatiewe bepaling van bloedglukose volgens die glukose-oksidase-metode

Die beginsel van die metode. Die metode is gebaseer op die spesifisiteit van die werking van die glukose-oksidase-ensiem. Hierdie ensiem oksideer glukose in die teenwoordigheid van molekulêre suurstof om glukonolaktoon te vorm, wat spontaan na glukonsuur hydroliseer. Glukose-oksidase oksideer glukose om waterstofperoksied te vorm (H₂O₂), wat reageer met 4-aminoantipyrien en fenol onder die werking van peroxidase. As gevolg hiervan word 'n pienk gekleurde verbinding gevorm, waarvan die optiese digtheid by 510 nm eweredig is aan die konsentrasie van glukose in die monster.

glukose + O₂ + H₂O → glukonsuur + H₂O₂

2 N₂O₂ + 4-aminoantipirien + fenol → kinoniem + 4H₂O

toerusting: CPK, sentrifuge, termostaat, rakke, proefbuise, pipette, biologiese materiaal, reagense in die werkoplossing.

eksperimentele monster, ml

standaardmonster, ml

ledige toets (N₂O), ml

Glukosekalibrasie-oplossing (verwysing)

Buise word 15 minute in 'n termostaat by 37 ° C geïnkubeer en dan op 'n CPC met 'n groen filter in kuvette met 'n laagdikte van 5 mm teen 'n leë monster gekleur.₂O). Die pienk kleur is stabiel vir 1 uur na inkubasie.

berekening glukose-inhoud word geproduseer deur die formule:

C =x C standaard waar

C is die glukose-inhoud in die eksperimentele monster, mol / l,

April - optiese digtheid van die monster,

Eet - optiese digtheid van die kalibrasiemonster,

C standaard - die inhoud in die kalibreringsoplossing, mol / l.

Normale waardes:  pasgeborenes - 2,8-4,4 mmol / l

 kinders - 3,9 -5,8 mmol / l

 volwassenes - 3,9 - 6,2 mmol / l

Hipoglukemie (GHC).Die toename in bloedglukose is as gevolg van baie redes, waarvolgens twee groepe hiperglikemie onderskei word.

1. Insulêr - geassosieer met onvoldoende insulien in die liggaam of as gevolg van die ondoeltreffendheid van die werking daarvan.

2. Buiteninsulêr (ekstrainsulêr) - is nie afhanklik van die invloed van insulien nie.

Die volgende prosesse is die belangrikste by die vorming van HHC's: verhoogde afbraak van glukogeen, verhoogde neoglukogenese, remming van glikogeen-sintese, verminderde glukoseverbruik van weefsel onder die invloed van hormonale insulienantagoniste: somatotropien, glukokortikoïede, tiroksien, tirotropien.

Spysverterende hiperglykemie word waargeneem met oormatige inname van glukose in die bloed (byvoorbeeld hiperglykemie met suikerbelasting). 'Hepatiese' hiperglykemie kom voor by diffuse lewerskade.

Aanhoudende en ernstige hiperglisemie gaan meestal saam met diabetes. Dit is gebruiklik om insulienafhanklike diabetes mellitus en nie-insulienafhanklike diabetes mellitus, of, onderskeidelik, tipe I diabetes mellitus en tipe II diabetes mellitus te isoleer. Die vorming van tipe I-diabetes word hoofsaaklik geassosieer met verswakte sintese en metabolisme van insulien.

Die tweede groep hiperglykemie word hoofsaaklik geassosieer met die hiperfunksie van die endokriene kliere wat hormone produseer - insulienantagoniste. Dit word waargeneem by siektes soos Itsenko-Cushing-sindroom en -siektes, akromegalie, tirotoksikose, feochromositoom, glukoganoom. Bloedglukosevlakke neem toe met sekere lewersiektes (veral in 10-30% van pasiënte met lewersirrose), hemochromatose (gepigmenteerde lewersirrose, brons diabetes).

Hipoglukemie (GPG) - 'n afname in bloedglukose - meestal geassosieer met 'n absolute of relatiewe toename in insulienvlakke in die bloed. Ekstrarapankreatiese hipoglykemie word opgemerk as gevolg van 'n wanbalans tussen die erns van die prosesse van glikogenolise en glykoneogenese in die lewer by akute en chroniese hepatitis, sirrose, akute en subakute lewerdistrofie, alkoholvergiftiging, vergiftiging met arseen, fosfor, met langdurige obstruktiewe geelsiekte, kongestiewe lewer . 'N Afname in bloedglukosekonsentrasie word gereeld waargeneem by pasiënte wat aan die slukderm kanker en ander kwaadaardige gewasse van lokalisasie buite die pankreas voorkom (fibroma, fibrosarcoma, neuroma), sowel as met braakbare braking, anorexia, lewersiekte, uremie, oorvloedige laktasie en glukosurie by swanger vroue.

Hipoglukemie kan van sentrale oorsprong wees as gevolg van geestelike trauma, enkefalitis, subarachnoïede bloeding, breingewas.

1. Erflike afwykings van die vertering van koolhidrate.

2. Watter tipes hiperglukoseemie is aan u bekend?

3. Wat is die oorsake van patologiese hiperglukoseemie?

4. Wat is die oorsaak van insulienafhanklike diabetes mellitus?

5. Wat is die biochemiese oorsake van oorerflike siektes: a) glikogenose? b) aglikogenose? c) fruktosemie? d) galaktosemie?

6. Wat is die biochemiese veranderinge in koolhidraatmetabolisme tydens vas?

7. Die beginsel van die metode om glukosetoleransie te bepaal.

Wanneer word die glukose-oksidase-metode voorgeskryf?

Hierdie toets word gebruik om verswakte suiker toleransie en die ontwikkeling van prediabetes op te spoor, sowel as op die hoogtepunt van die siekte. Maar vir sulke doeleindes word ontleding selde gebruik, dit is te danke aan die hoë koste en lang verwagting van 'n resultaat. Die bepaling van glukose in die bloed en urine met behulp van hierdie metode word meestal gebruik vir die differensiële diagnose van siektes soos:

Suiker word onmiddellik verminder! Diabetes met verloop van tyd kan tot 'n hele aantal siektes lei, soos gesigsprobleme, vel- en haartoestande, maagsere, gangreen en selfs kankergewasse! Mense het bitter ervaring geleer om hul suikervlakke te normaliseer. lees verder.

laktose-intoleransie-sindroom,
fruktose-onverdraagsaamheid,
sekresie van fruktose met liggaamsvloeistowwe,
verhoogde konsentrasie van pentose in die urine.

Die ongetwyfelde voordeel van die glukose-oksidasetoets is die akkuraatheid daarvan.

Wat is die basis van hierdie metode?

Daar is verskillende metodes om die konsentrasie van glukose in die bloed te bepaal, maar glukose-oksidase is die akkuraatste. Dit is gebaseer op die feit dat die reagens tydens die interaksie van suiker met atmosferiese suurstof geoksideer word. Waterstofperoksied word in die oplossing vrygestel. Hierdie stof is in wisselwerking met ortotoluidien om 'n gekleurde verbinding te vorm. Vir die reaksie van hierdie reaksie is die teenwoordigheid van spesiale ensieme nodig. Tydens die oksidasie-reaksie moet glukose-oksidase teenwoordig wees, en wanneer die vloeistof gekleur word, moet peroxidase teenwoordig wees. Die kleurintensiteit van die oplossing sal afhang van die glukose-inhoud en sal die sterkste wees by die hoë inhoud.

Die kern van glukose-oksidase-glukose-bepaling

Evaluering van die resultaat geskied met behulp van die kwantitatiewe metode van fotometrie na dieselfde periode. Dit is verpligtend om 'n kalibreringsoplossing te gebruik wat 'n sekere verklaarde suikernorm bevat, en om daaruit te begin, kan u die konsentrasie van glukose in die liggaamsvloeistowwe, dikwels in die bloed, beoordeel.

Hoe word die ontleding gedoen?

Materiaal word op 'n leë maag van die pasiënt geneem. Vir die toets word veneuse bloed in 'n hoeveelheid van 5 ml gebruik. Aan die vooraand van die diagnose word die pasiënt streng toegepas. Dit sal dit moontlik maak om die betroubaarheid van die resultaat te beoordeel en moontlike ontledingsfoute uit te sluit. 2 dae voordat hy die bloed inneem, moet die pasiënt die slegte gewoontes van alkohol en rook laat vaar. Dit is ook nodig om die inname van té soet kosse te beperk en stresvolle situasies te vermy waar moontlik.

Om plasma met suiker te verkry, word bloed gesentrifugeer.

Dikwels word hierdie metode vir die bepaling van glukosekonsentrasie uitgevoer deur sentrifugering, wat vorm elemente wat geïsoleer word. Die hoeveelheid suiker word reeds in plasma bepaal. As al die nodige reagense daarby gevoeg word, word die kleur na 20 minute waargeneem as die toets by kamertemperatuur uitgevoer word. Die berekening van glukose word uitgevoer volgens die kalibreringskedule of volgens die reël van porsies.

Navorsingsreagens

Om suiker te bepaal, is dit die beste om uitdruklike metodes te gebruik om glukose in die bloed te bepaal. Dit is te wyte aan die gebruiksgemak en vinnige resultate. Daarbenewens hoef die pasiënt nie na die laboratorium of hospitaal te gaan nie. Maar anders as die glukose-oksidasetoets, is so 'n diagnose onbetroubaar. Aangesien dit nie glukose van ander suikers onderskei nie en hulle konsentrasie saam bepaal.

Die basis van die glukose-oksidase-reaksie is 9% natriumchloriedoplossing en sinksulfaat 50%. Dit word bygevoeg op die stadium van die sentrifugering van bloed. Daarbenewens word 'n bufferoplossing met asynsuur en natriumasetaat gebruik. Die titrasiemetode bepaal die pH daarvan op 4,8. Daarna word glukose-oksidase bygevoeg, waardeur waterstofperoksied en peroxidase vrygestel word, wat deelneem aan die kleuring van die oplossing tot die gewenste konsentrasie om 'n akkurate resultaat te verkry.

Norme in die ontleding

Die meting van suiker vind plaas in spesiale eenhede - millimol per liter oplossing.

Glukose oksidase bloedtoets moet op 'n leë maag slaag en plasma of serum hiervoor gebruik. Die norm vir die hoeveelheid volwassenes vir vroue en mans is 3.3-5.5. Vir kinders jonger as 15 jaar is hierdie syfer effens laer en wissel dit tussen 3.2-5.3. By pasgeborenes is bloedglukose 1,7-4,2. 'N Toename in aanwysers word waargeneem met die ontwikkeling van diabetes mellitus by 'n pasiënt of met 'n verminderde glukosetoleransie. Hierdie toestand is prediabetes, en as dit betyds onbehandel word, sal dit binnekort lei tot die ontwikkeling van hierdie ernstige patologie.

Lyk dit nog steeds onmoontlik om diabetes te genees?

Te oordeel na die feit dat u hierdie lyne nou lees, is 'n oorwinning in die stryd teen hoë bloedsuiker nog nie aan u kant nie.

En het u al gedink aan hospitaalbehandeling? Dit is te verstane, want diabetes is 'n baie gevaarlike siekte, wat, indien dit nie behandel word nie, tot die dood kan lei. Konstante dors, vinnige urinering, vaag visie. Al hierdie simptome is u eerstehands bekend.

Maar is dit moontlik om die oorsaak te behandel eerder as die effek? Ons beveel aan dat u 'n artikel oor huidige diabetesbehandelings lees. Lees die artikel >>